Ова најстарија музејска установа основана је 1844. године на иницијативу српског књижевника Јована Стерије Поповића, од 1952. године налази се у садашњем здању саграђеном 1903. године, по пројекту архитеката Николе Несторовића и Андре Стевановића. У Музеју се чувају праисторијске и класичне археолошке колекције, колекције везане за средњовековну културу и уметност, колекције сликара од 18. до 20. века, колекција иностраних уметничких дела и богато нумизматичко одељење.

Највреднији експонат у Народном музеју је Мирослављево јеванђеље – најстарији и најдрагоценији рукопис написан ћирилицом, настао око 1190. године, по наруџбини хумског кнеза Мирослава, о чему говори запис на последњем листу књиге. Текст ове богослужбене књиге писан је пером и садржи 296 минијатура цртаних пером, а затим бојених четкицом црвеном, зеленом, жутом и белом бојом и украшених златом. Мирослављево јеванђеље, као највреднији споменик српске културе, добио је и званично добио епитет најлепшег ћириличног рукописа на свету и уписан је у регистар УНЕСЦО – „Памћење света“. У саставу Народног музеја су и: Вуков и Доситејев музеј и Галерија фресака.